22. M 基因编码的 M 蛋白在动物 A 的肝细胞中特异性表达。现设计实验，将外源 DNA 片段 F 插入 M 基因
的特定位置，再通过核移植、胚胎培养和胚胎移植等技术获得 M 基因失活的转基因克隆动物 A，流程如图
所示。回答下列问题：
（1） 在构建含有片段F 的重组质粒过程中，切割质粒DNA 的工具酶是_________，这类酶能将特定部位的
两个核苷酸之间的_________断开。
（2） 在无菌、无毒等适宜环境中进行动物A 成纤维细胞的原代和传代培养时，需要定期更换培养液，目的
是_________。
（3）与胚胎细胞核移植技术相比，体细胞核移植技术的成功率更低，原因是_________。从早期胚胎中 pts
离获得的胚胎干细胞，在形态上表现为_________（答出两点即可） ，功能上具有_________。
（4）鉴定转基因动物：以免疫小鼠的_________淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合，筛选融合杂种细胞，制
备 M 蛋白的单克隆抗体。简要写出利用此抗体确定克隆动物A 中 M 基因是否失活的实验思路_________。
Answer key
(1). 限制性核酸内切酶（限制酶） (2). 磷酸二酯键 (3). 清除代谢产物，防止细胞代谢 产物积累对细胞自身造成危害，同时给细胞提供足够的营养 (4). 动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全 能性相对容易，动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难 (5). 细胞体积小，细胞核大，核仁明显 （任选两点作答） (6). 发育的全能性 (7). B (8). 取动物 A 和克隆动物 A 的肝组织细胞，分别提 取蛋白质进行抗原— 抗体杂交