美西螈具有很强的再生能力。研究表明，美西螈的巨噬细胞在断肢…——2022 高考生物第 13 题答案解析

13. 美西螈具有很强的再生能力。研究表明，美西螈的巨噬细胞在断肢再生的早期起重要作用。为研究巨
噬细胞的作用机制，科研人员制备了抗巨噬细胞表面标志蛋白 CD14 的单克隆抗体，具体方法如下。回答
下列问题：

（一）基因工程抗原的制备
（1）根据美西螈 CD14 基因的核苷酸序列，合成引物，利用 PCR 扩增 CD14 片段。已知 DNA 聚合酶催化
引物的 3’—OH 与加入的脱氧核苷酸的5’—P 形成磷酸二酯键，则新合成链的延伸方向是_____（填
“ 5’→3’ ”或“ 3’→5’ ”） 。

（2）载体和 CD14 片段的酶切位点及相应的酶切 抗性基因序列如图 1 所示。用 Xho I 和 Sal 1 分别酶切
CD14 和载体后连接，CD14 接入载体时会形成正向连接和反向连接的两种重组DNA．可进一步用这两种
限制酶对 CD14 的连接方向进行鉴定，理由是_____。
培养能表达 CD14 蛋白的大肠杆菌，分离纯化目的蛋白。
（二）抗 CD14 单克隆抗体的制备流程如图 2 所示：

（3）步骤①和步骤⑤分别向小鼠注射_____和_____。
（4）步骤②所用的 SP2/0 细胞的生长特点是_____。
（5）吸取③中的上清液到④的培养孔中，根据抗原— 抗体杂交原理，需加入 ① 进行专一抗体检测，
检测过程发现有些杂交瘤细胞不能分泌抗 CD14 抗体，原因是 ② 。
（6）步骤⑥从_____中提取到大量的抗 CD14 抗体，用于检测巨噬细胞。