某种荧光蛋白（GFP）在紫外线或蓝光激发下会发出绿色荧光，…——2018 高考生物第 12 题答案解析

12．某种荧光蛋白（GFP）在紫外线或蓝光激发下会发出绿色荧光，这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病毒的外壳蛋白（L1）基因连接在 GFP 基因的 5′末端，获得了 L1﹣GFP 融合基因（简称甲），并将其插入质粒PO，构建了真核表达载体P1，其部分结构和酶切点的示意图如下，图中E1～E4四种限制酶产生的黏性末端各不相同。

回答下列问题：

（1）据图推断，该团队在将甲插入质粒 PO 时，使用了两种限制酶，这两种酶是　E1、E4　。使用这两种酶进行酶切是为了保证　甲的完整　，也是为了保证　甲与载体正确连接　。

（2）将P1转入体外培养的牛皮肤细胞后，若在该细胞中观察到了绿色的荧光，则说明L1基因在牛的皮肤细胞中完成了　转录　和　翻译　过程。

（3）为了获得含有甲的牛，该团队需要做的工作包括：将能够产生绿色荧光细胞的　细胞核　移入牛的　去核卵母细胞　中，体外培养，胚胎移植等。

（4）为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中，某同学用PCR方法进行鉴定。在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的　核 DNA　（填“mRNA”“总

RNA”或“核 DNA”）作为 PCR 模板。