【答案】 (1). 限制性核酸内切酶（限制酶） (2). 磷酸二酯键 (3). 清除代谢产物，防止细胞代谢
产物积累对细胞自身造成危害，同时给细胞提供足够的营养 (4). 动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全
能性相对容易，动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难 (5). 细胞体积小，细胞核大，核仁明显
（任选两点作答） (6). 发育的全能性 (7). B (8). 取动物 A 和克隆动物 A 的肝组织细胞，分别提
取蛋白质进行抗原— 抗体杂交
【解析】
【分析】1、基因工程技术的基本步骤：
①目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR 技术扩增和人工合成；
②基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记
基因等；
③将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方
法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将
目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；
④ 目的基因的检测与鉴定 ： 分子水平上的检测 ：①检测转基因生物染色体的DNA 是否插入目的基因--DNA
分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了 mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--
抗原-抗体杂交技术，个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
2、核移植：
（1）概念：将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新
的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物；
（2）原理：动物细胞核的全能性；
（3）动物细胞核移植可分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移
植。原因：动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易，动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十
分困难。
【详解】 （1） 基因工程中切割DNA 的工具酶是限制性核酸内切酶（限制酶） ，故在构建含有片段F 的重组质
粒过程中，切割质粒DNA 的工具酶是限制性核酸内切酶（限制酶） 。限制性内切核酸内切酶是作用于其所识
别序列中两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。不同的限制酶可以获得不同的末端，主要分为黏性末端和平
末端。
（2）在无菌、无毒等适宜环境中进行动物A 成纤维细胞的原代和传代培养时，需要定期更换培养液，目的
是清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害。
（3）由于动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易，动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分
困难，故与胚胎细胞核移植技术相比，体细胞核移植技术的成功率低。胚胎干细胞在形态上表现为细胞体
积小，细胞核大，核仁明显；在功能上具有发育的全能性，可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另
外，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可进行遗传改造。
（4）先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B 淋巴细胞；诱导 B 细
胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，制备 M 蛋白的单克隆抗体；若要利用此抗体确
定克隆动物 A 中M 基因是否失活，如果M 基因已经失活，则克隆动物A 中无法产生 M 蛋白的单克隆抗体，
则可利用抗原— 抗体杂交技术进行检测。故实验思路为：取动物 A 和克隆动物 A 的肝组织细胞，分别提取
蛋白质进行抗原— 抗体杂交。
【点睛】本题结合图示考查基因工程、核移植、胚胎移植、单克隆抗体的相关知识，涉及知识点较多，但
难度不大，要求考生掌握基础知识，属于考纲中识记与理解层次。