天然 β 淀粉酶大多耐热性差，不利于工业化应用。我国学者借…——2023 高考生物第 27 题答案解析

【答案】 （1）蛋白质 （2）③ （3）②
（4）标记基因 （5） ①. 筛选导入目的基因的大肠杆菌 ②. 5.7
（6）逆转录
【解析】
【分析】基因工程技术的基本步骤：1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用 PCR 技术扩增
和人工合成。2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、
终止子和标记基因等。3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的
基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的
方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。4、目的基因的检测与鉴定：

（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的 DNA 是否插入目的基因--DNA 分子杂交技术；②
检测目的基因是否转录出了 mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技
术。 （2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【小问 1 详解】
根据蛋白质的功能改变基因的结构，最终获得耐高温的 β-淀粉酶，这属于蛋白质工程。
小问 2 详解】
PCR 的原理是 DNA 双链复制，利用的酶是耐热的DNA 聚合酶，合成子链时是以 DNA 为模板。
【小问 3 详解】
根据 β-淀粉酶的编码序列，替换的碱基在编码序列中，则利用的引物应该把编码序列全部扩增在内，则所
用的引物是②③。含已替换碱基的引物是②。
【小问 4 详解】
作为基因工程载体的质粒应该包含：复制原点、限制酶的切割位点、标记基因、启动子和终止子，根据图
示的表达载体可知应还要包括目的基因和标记基因。
【小问 5 详解】
目的基因通过表达载体导入大肠杆菌中，大肠杆菌菌落的质粒 DNA，经琼脂糖凝胶电泳确定 DNA 片段长
度，这一操作的目的是筛选出导入目的基因的大肠杆菌。正确连接的基因表达载体只有一个 EcoR Ⅰ酶切位
点，则切割后的长度为 $4.2+1.5=5.7kb$。
【小问 6 详解】
转录是以 DNA 为模板合成 RNA 的过程，通过 PCR 在分子水平上确定目的基因是否转录，则需要以 RNA
为模板逆转录出 DNA 作为 PCR 反应的模板。
【