13. 美西螈具有很强的再生能力。研究表明，美西螈的巨噬细胞在断肢再生的早期起重要作用。为研究巨噬细胞的作用机制，科研人员制备了抗巨噬细胞表面标志蛋白CD14 的单克隆抗体，具体方法如下。回答下列问题：
（一）基因工程抗原的制备
（1）根据美西螈CD14 基因的核苷酸序列，合成引物，利用PCR扩增CD14 片段。已知DNA 聚合酶催化引物的3’—OH 与加入的脱氧核苷酸的5’—P 形成磷酸二酯键，则新合成链的延伸方向是$\_\_\_\_\_$（填“5’→3’”或“3’→5’”）。
图1
（2）载体和CD14 片段的酶切位点及相应的酶切 抗性基因序列如图 1所示。用Xho I 和Sal 1分别酶切CD14 和载体后连接，CD14 接入载体时会形成正向连接和反向连接的两种重组DNA．可进一步用这两种限制酶对CD14 的连接方向进行鉴定，理由是
培养能表达CD14 蛋白的大肠杆菌，分离纯化目的蛋白。
（二）抗CD14 单克隆抗体的制备流程如图2所示：
（3）步骤①和步骤⑤分别向小鼠注射$\_\_\_\_\_$和$\_$
（4）步骤②所用的SP2/0 细胞的生长特点是
（5）吸取③中的上清液到④的培养孔中，根据抗原—抗体杂交原理，需加入 ① 进行专一抗体检测，检测过程发现有些杂交瘤细胞不能分泌抗CD14 抗体，原因是 ②
（6）步骤⑥从 $\_\_\_\_\_$中提取到大量的抗CD14 抗体，用于检测巨噬细胞。
(1) 5'→3'; (2) 正向连接的重组 DNA 有这两种酶切位点（限制酶的识别序列）；而反向连接的重组 DNA 会形成新的序列，没有这两种酶的酶切位点（没有限制酶的识别序列）; (3) ①. CD14 蛋白/CD14 抗原 ②. 分泌抗 CD14 抗体的杂交瘤细胞; (4) 能在体外无限增殖; (5) ①. CD14 蛋白 ②. 参与形成杂交瘤细胞的 B 淋巴细胞种类多，有的不能分泌抗 CD14 抗体; (6) 小鼠腹水