12. 某同学采用基因工程技术在大肠杆菌中表达蛋白E。回答下列问题。
（1）该同学利用PCR扩增目的基因。PCR的每次循环包括变性、复性、延伸3个阶段，其中DNA 双链打开成为单链的阶段是 $\_$，引物与模板DNA 链碱基之间的化学键是
（2）质粒载体上有限制酶a、b、c的酶切位点，限制酶的切割位点如图所示。构建重组质粒时，与用酶a单酶切相比，用酶a和酶b双酶切的优点体现在 （答出两点即可）；使用酶c单酶切构建重组质粒时宜选用的连接酶是 0
（3）将重组质粒转入大肠杆菌前，通常先将受体细胞处理成感受态，感受态细胞的特点是 $\_\_$；若要验证转化的大肠杆菌中含有重组质粒，简要的实验思路和预期结果是
（4）蛋白 E 基因中的一段 DNA 编码序列（与模板链互补）是 GGGCCCAAGCTGAGATGA，编码从GGG 开始，部分密码子见表。若第一个核苷酸 G 缺失，则突变后相应肽链的序列是
<table><tr><td colspan="1" rowspan="1">氨基酸</td><td colspan="1" rowspan="1">密码子</td></tr><tr><td colspan="1" rowspan="1">赖氨酸</td><td colspan="1" rowspan="1">AAG</td></tr><tr><td colspan="1" rowspan="1">精氨酸</td><td colspan="1" rowspan="1">AGA</td></tr><tr><td colspan="1" rowspan="1">丝氨酸</td><td colspan="1" rowspan="1">AGC</td></tr><tr><td colspan="1" rowspan="1">脯氨酸</td><td colspan="1" rowspan="1">CCA</td></tr><tr><td colspan="1" rowspan="1"></td><td colspan="1" rowspan="1">CCC</td></tr><tr><td colspan="1" rowspan="1">亮氨酸</td><td colspan="1" rowspan="1">CUG</td></tr><tr><td colspan="1" rowspan="2">甘氨酸</td><td colspan="1" rowspan="1">GGC</td></tr><tr><td colspan="1" rowspan="1">GGG</td></tr><tr><td colspan="1" rowspan="1">终止</td><td colspan="1" rowspan="1">UGA</td></tr></table>
(1) ①. 变性; (2) 氢键 （2） ①. 避免目的基因和质粒的任意连接、防止目的基因和质粒的自身环化 $\mathrm { T _ { 4 } D N A }$ 连接酶; (3) ①. 细胞处于一种能吸收周围环境中DNA 分子的生理状态 ②. 利用DNA 分子杂交技术，将大肠杆菌的基因组 DNA 提取出来，在含有目的基因的 DNA 片段上用放射性同位素等作标记，以此作为探针，使探针与基因组DNA 杂交，如果显示出杂交带，表明大肠杆菌中含有重组质粒; (4) 甘氨酸-脯氨酸-丝氨酸