某小组为研究真菌基因 m 的功能，构建了融合表达蛋白M 和…——2021 高考生物第 23 题答案解析

【答案】 ① ①. RNA ②. 蛋白 M 上不含 tag 标签 ③. BC
（2） ①. 黏性末端碱基配对 ②. DNA 连接 ③. 基因 m 的连接处、基因 m 的内部
（3） ①. 受体菌在无尿嘧啶的培养基上无法生长，导入重组质粒的受体菌含有URA3 基因可以长成菌
落 ②. 融合基因表达（或融合基因正确解码）
【解析】
【分析】基因工程技术的基本步骤：
①目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用 PCR 技术扩增和人工合成。
②基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记
基因等。
③将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方
法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将
目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
④目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA 是否插入目的基因
--DNA 分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了 mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成
蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【小问 1 详解】
①以逆转录获得 cDNA 的方式，要先从真菌细胞中提取基因m 转录出来的 mRNA。
②从构建好的重组质粒上看，tag 序列位于目的基因下游，若 m 基因的转录产物 mRNA 上有终止密码子，
核糖体移动到终止密码子多肽链就断开，则不会对tag 序列的转录产物继续进行翻译，蛋白M 上就不含tag
标签。
③A、从题干信息可知，“80℃以上再混入酶，然后直接从94℃开始 PCR 扩增”，故Taq 酶最适催化温度范
围为 94℃左右，A 错误；

B、PCR 反应的最初加热过程中，样品温度上升到 70℃之前，在较低的温度下引物可能与部分单链模板形
成非特异性结合，并在 Taq DNA 聚合酶的作用下延伸，结果会导致引物错配形成的产物的扩增，影响反应
的特异性；热启动可减少引物错配形成的产物的扩增，提高反应的特异性，B 正确；
C、DNA 分子复制具有方向性，都是从 5′端向 3′端延伸，C 正确；
D、Taq 酶没有特异性，与普通的DNA 聚合酶相比，Taq 酶更耐高温，D 错误。
故选 BC。
【小问 2 详解】
①从图上看，载体A 只有一个 Sma I 的酶切位点，故被Sma I 切开后，载体由环状变为链状DNA，将Sma
I 切开的载体 A 与添加同源序列的m 混合，用特定 DNA 酶处理形成黏性末端，然后降温以促进载体 A 与
添加同源序列的 m 的黏性末端碱基互补配对。将 A-m 结合体导入大肠杆菌，利用大肠杆菌中的 DNA 聚合
酶及 DNA 连接酶等，完成质粒的环化。
②重组质粒中，载体A 被 Sma I 切开的位置已经与基因m 相连，原来的酶切位点已不存在，若正确构建的
重组质粒 A—m 仍能被 Sma I 切开，则 Sma I 的酶切位点可能在基因 m 的连接处或基因 m 内部。
【小问 3 详解】
①筛选目的菌株的机理是：导入了质粒A-m 的目的菌株由于含有URA3 基因，能在无尿嘧啶的培养基上存
活，而 URA3 基因缺失型酵母则不能存活。
②若通过抗原一抗体杂交实验检测到酵母蛋白中含lag 标签，位于 lag 标签上游的基因 m 应该正常表达，
说明融合基因表达（或融合基因正确解码） 。
【点睛】本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细
节，能将教材中的知识结合题中信息进行知识迁移，准确答题。