（9分）下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中…——2016 高考生物第 33 题答案解析

33．（9分）下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶

切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：

<table><tr><td rowspan=1 colspan=1>限制酶</td><td rowspan=1 colspan=1>BamH I</td><td rowspan=1 colspan=1>Bcl I</td><td rowspan=1 colspan=1> $\mathrm { S a u } 3 \mathrm { A } \mathrm { ~ I ~ }$ </td><td rowspan=1 colspan=1>HindIII</td></tr><tr><td rowspan=1 colspan=1>识别序列及切割位点</td><td rowspan=1 colspan=1> $\operatorname { d } _ { \operatorname { G } \operatorname { G A T C } \operatorname { C } }$ $\mathrm { c c r a s e } { \mathrm { c } } \mathrm { c } { \mathrm { c } } $ </td><td rowspan=1 colspan=1> $\operatorname { l } _ { \operatorname { G A I C A } }$ $\mathsf { A C T A G } _ { \mathsf { f } } ^ { \mathsf { T } }$ </td><td rowspan=1 colspan=1> $\downarrow _ { \mathtt { G A T C } }$ $^ \mathrm { C T A G } \dag$ </td><td rowspan=1 colspan=1> $\downarrow _ { \substack { \scriptscriptstyle \mathrm { A G C T } 1 } }$ $m _ { f }$ </td></tr></table>

图1

图2

（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用　BclI和HindⅢ　两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过　连接　酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于　感受　态的大肠杆菌。

（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加　四环素　平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中　引物甲和引物丙　。

（3）若BamH I 酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA 末端连接，连接部位的6个碱基

对序列为 $\begin{array} { r } { \mathrm { { T } \ C A T C \ C \left( C \ C A T C \ A \right) } } \\ { \mathrm { { A } \ C T A G \ C \ C } } \end{array} { }$ ，对于该部位，这两种酶　都不能（填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。

（4）若用Sau3A I 切图1质粒最多可能获得　7　种大小不同的DNA 片段。