某小组通过 PCR（假设引物长度为8 个碱基短于实际长度）…——2023 高考生物第 13 题答案解析

【答案】B
【解析】
【分析】E.coliDNA 连接酶只能连接黏性末端；T4DNA 连接酶既可连接平末端，又可连接黏性末端。
【详解】A、由于引物只能引导子链从5＇到3＇，根据碱基互补配对原则，其中一个引物序列为5＇
TGCGCAGT-3＇，A 正确；
B、根据三种酶的酶切位点，左侧的黏性末端是使用 NheI 切割形成的，右边的黏性末端是用 CfoI 切割形
成的，B 错误；
C、用步骤①的酶对载体进行酶切，使用了 NheI 和 CfoI 进行切割，根据他们的识别位点以及原本 DNA 的
序列，切割之后至少获得了 2 个片段，C 正确；
D、图中形成的是黏性末端，而E.coliDNA 连接酶只能连接黏性末端；T4DNA 连接酶既可连接平末端，又
可连接黏性末端，D 正确。
故选 B。