21. 变胖过程中,胰岛 B 细胞会增加。增加的 B 细胞可能源于自身分裂(途径 I) ,也可能来自胰岛中干细
胞的增殖、分化(途径Ⅱ) 。科学家采用胸腺嘧啶类似物标记的方法,研究了L 基因缺失导致肥胖的模型小
鼠 IK 中新增B 细胞的来源。
(1)EdU 和 BrdU 都是胸腺嘧啶类似物,能很快进入细胞并掺入正在复制的DNA 中,掺入 DNA 的 EdU
和 BrdU 均能与___________互补配对,并可以被分别检测。未掺入的 EdU 和 BrdU 短时间内即被降解。
(2)将处于细胞周期不同阶段的细胞混合培养于多孔培养板中,各孔同时加入 EdU,随后每隔一定时间
向一组培养孔加入 BrdU,再培养十几分钟后收集该组孔内全部细胞,检测双标记细胞占 EdU 标记细胞的
百分比(如图) 。图中反映DNA 复制所需时长的是从___________点到___________点。
(3)为研究变胖过程中 B 细胞的增殖,需使用一批同时变胖的小鼠。为此,本实验使用诱导型基因敲除
小鼠,即饲喂诱导物后小鼠的 L 基因才会被敲除,形成小鼠 IK。科学家利用以下实验材料制备小鼠 IK:
①纯合小鼠 Lx:小鼠 L 基因两侧已插入特异 DNA 序列(x) ,但L 的功能正常;②Ce 酶基因:源自噬菌
体,其编码的酶进入细胞核后作用于 x,导致两个 x 间的 DNA 片段丢失;③Er 基因:编码的 Er 蛋白位于
细胞质,与 Er 蛋白相连的物质的定位由 Er 蛋白决定;④口服药 T:小分子化合物,可诱导 Er 蛋白进入细
胞核。请完善制备小鼠 IK 的技术路线:______________________→连接到表达载体→转入小鼠 Lx→筛选
目标小鼠→____________→获得小鼠 IK。
(4)各种细胞 DNA 复制所需时间基本相同,但途径 I 的细胞周期时长(t1)是途径Ⅱ细胞周期时长(t2)
的三倍以上。据此,科学家先用 EdU 饲喂小鼠 IK,t2 时间后换用 BrdU 饲喂,再过 t2 时间后检测 B 细胞被
标记的情况。研究表明,变胖过程中增加的 B 细胞大多数来源于自身分裂,与之相应的检测结果应是
_________________________。
(1)A##腺嘌呤 (2) ①. Q ②. R (3) ①. 将 Ce 酶基因和Er 基因连接 ②. 饲喂口服药 T (4)大多数 B 细胞没有被BrdU 标记