PHB2 蛋白具有抑制细胞增殖的作用。为初步探究某动物PH…——2021 高考生物第 24 题答案解析

24. PHB2 蛋白具有抑制细胞增殖的作用。为初步探究某动物PHB2 蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖的原因，研
究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列（简称phb2 基因） ，大小为0．9kb（$1kb=1000$ 碱基对） ，
利用大肠杆菌表达该蛋白。回答下列问题：

（1）为获取 phb2 基因，提取该动物肝脏组织的总 RNA，再经__________过程得到 cDNA，将其作为 PCR
反应的模板，并设计一对特异性引物来扩增目的基因。
（2）图 1 为所用载体图谱示意图，图中限制酶的识别序列及切割位点见下表。为使 phb2 基因（该基因序
列不含图 1 中限制酶的识别序列）与载体正确连接，在扩增的 phb2 基因两端分别引入__________和
__________两种不同限制酶的识别序列。经过这两种酶酶切的 phb2 基因和载体进行连接时，可选用
__________（填“ E．coliDNA 连接酶”或“ T4DNA 连接酶”） 。

相关限制酶的识别序列及切割位点
名称 识别序列及切割位点 名称 识别序列及切割位点
HindⅢ
A↓AGCTT
TTCGA↑A
EcoRI
G↓AATTC
CTTAA↑G

PvitⅡ
CAG↓CTG
GTC↑GAC
PstI
CTGC↓AG
GA↑CGTC
KpnI
G↓GTACC
CCATG↑G
BamHI
G↓GATCC
CCTAG↑G
注：箭头表示切割位点
（3）转化前需用 CaCl2 处理大肠杆菌细胞，使其处于__________的生理状态，以提高转化效率。
（4） 将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养，随机挑取菌落（分别编号为1、2、3、
4）培养并提取质粒，用（2）中选用的两种限制酶进行酶切，酶切产物经电分离，结果如图2，________号
菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒。
注：M 为指示分子大小的标准参照物；小于 0．2kb 的 DNA 分子条带未出现在图中
（5）将纯化得到的 PHB2 蛋白以一定浓度添加到人宫颈癌细胞培养液中，培养24 小时后，检测处于细胞
周期（示意图见图 3）不同时期的细胞数量，统计结果如图4。分析该蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖可能的原
因是将细胞阻滞在细胞周期的__________（填“ G1”或“ S”或“ G2/M”）期。