（11分） 平沙绿僵菌是一种昆虫病原真菌，通过分生孢子侵染…——2026 高考生物第 25 题答案解析

25. （11分）

平沙绿僵菌是一种昆虫病原真菌，通过分生孢子侵染蚊子，对蚊子致死率高，但引诱能力弱。利用松树长叶烯合酶基因（Tps）改造平沙绿僵菌，增强其引诱能力，据此研发“诱杀一体”的灭蚊剂。回答下列问题。

注：盾粒中限制酶切割位点间碱基对长度可忽略不计；kb：千碱基对。

（1）为提高Tps基因在平沙绿僵菌中的表达效率，重新设计了长叶烯合酶编码序列，该序列与天然基因序

列存在较大差异，但编码的氨基酸序列不变，获取该目的基因的方法是

实验如上图，用限制酶EcoRV切割 $\mathsf { p P K 2 }$ 质粒，然后与 $T p s$ 基因连接，用 (填 $^ { \omega } E . c o l i ^ { \prime \prime }$ 或“T4”）DNA连接酶可获得更高的连接效率。

经卡那霉素筛选得到的农杆菌中，除含有目的基因的重组质粒外，还可能存在 。为鉴定重组质粒是否正确连接，利用限制酶切割并电泳检测，下列限制酶组合和片段大小，属于正确连接的是和A. BamH I/EcoRI、0.7kb+6.1kb B.BamH I/EcoRI、1.1kb+5.7kbC. Hind III/EcoRI、0.7kb+6.1kb D. Hind III/EcoRI、1.1kb+5.7kb

农杆菌转化后，重组质粒上的T-DNA会转移并整合到平沙绿僵菌的 上。

为筛选工程化平沙绿僵菌，用PCR技术进行鉴定。Tps基因的转录模板链部分序列为： $5 \%$ $\mathrm { A T G T C G T T C C } \mathrm { \cdots } \mathrm { A A T T G G C T C C } { \mathrm { - } } 3 ^ { \prime } ,$ 下列引物对可用于扩增该片段的是A. $5 ^ { \prime } \mathrm { - A T G T C } \mathrm { - } 3 ^ { \prime } \mathrm { - } 5 ^ { \prime } \mathrm { - C C T C G } \mathrm { - } 3 ^ { \prime }$ B. 5′-ATGTC…-3'、5′-GGAGC…-3'C. $\mathrm { 5 ^ { \prime } - T A C A G ^ { \bullet \cdots - 3 ^ { \prime } } } , \mathrm { ~ } 5 ^ { \prime } \mathrm { - C C T C G ^ { \bullet \cdots - 3 ^ { \prime } } }$ D. $\mathrm { 5 ^ { \prime } – T A C A G } ^ { \bullet \bullet \bullet \bullet } \mathrm { 3 ^ { \prime } \bullet \overline { { { 5 ^ { \prime } } } } \mathrm { G G A G C } \bullet \cdots \bullet ^ { \prime } }$

（2）研究人员比较了等量平沙绿僵菌和工程菌培养物对蚊子的诱杀效果，如下表。

<table><tr><td rowspan=1 colspan=1>相关指标培养物</td><td rowspan=1 colspan=1>访问次数(次/小时)</td><td rowspan=1 colspan=1>停留时间(分钟/小时)</td><td rowspan=1 colspan=1>2 小时感染率(%)</td><td rowspan=1 colspan=1> $\mathrm { L T } _ { 5 0 }$ (天)</td><td rowspan=1 colspan=1>第7天死亡率(%)</td></tr><tr><td rowspan=1 colspan=1>平沙绿僵菌</td><td rowspan=1 colspan=1>0.9</td><td rowspan=1 colspan=1>1.1</td><td rowspan=1 colspan=1>100</td><td rowspan=1 colspan=1>5.84</td><td rowspan=1 colspan=1>62.4</td></tr><tr><td rowspan=1 colspan=1>工程菌</td><td rowspan=1 colspan=1>2.4</td><td rowspan=1 colspan=1>5.9</td><td rowspan=1 colspan=1>100</td><td rowspan=1 colspan=1>4.04</td><td rowspan=1 colspan=1>84.3</td></tr></table>

注：感染率：感染孢子的蚊子比例； $\mathrm { L T } _ { 5 0 }$ (半数致死时间)：导致50%蚊子死亡所需的平均时间。已知孢子附着量决定蚊子死亡速度，结合表中数据解释工程菌培养物使蚊子的 $\mathrm { L T } _ { 5 0 }$ 显著缩短且第7天死亡率更高的原因是

（3）该工程菌制剂在推广前，需经过严格的 评价，符合标准后方可推广。